滑石粉微生物学检验方法

1 主题内容与适用范围 本标准规定了滑石粉的微生物学检验方法及范围。 本标准适用于医药、食品及化妆品用滑石粉的微生物学检验。 2 术语 菌落总数：指样品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含细菌菌落 总数。 3 检验通则 3.1 取样及注意事项 3.1.1 每批滑石粉应随机抽两个或两个以上包装完好的单位，试样量不少于10g，以使检验 结果具有代表性。 3.1.2 凡异常的供试品，则选取有疑问的样品进行检验。凡包装开户可见霉变的、无须检 验即可判为不合格。 3.1.3 在检验前，应严格保持包装的原有状态，防止再污染。并放在阴凉干燥处。防止因 微生物再繁殖而影响检验结果。凡原包装已启开，则无代表性。 3.1.4 样品的稀释，须在1～2h内完成，以防止微生物繁殖或死亡。 3.1.5 微生物检验全过程，必须在无菌操作条件下进行，凡直接与样品接触的用具，均应 事先灭菌并保持无菌。 3.1.6 从样品检出致病菌的报告发出之日起，该菌菌种需保存一个月备查，阴性样品可及 时处理。 3.2 供试液制备的材料和仪器 a. 天平：感量0.1g； b. 三角烧瓶：300mL或500mL； c. 玻璃珠：φ5mm； d. 量筒：100mL； e. 电炉； f. 高压消毒锅； g. 滤纸。 3.3 供试液的制备方法 称10g试样，放入装有90mL稀释剂(生理盐水)和十几个玻璃珠的三角烧瓶中，经振摇制 成1∶10的试液备用。取用时必须混匀。 3.4 阳性菌株对照试验 3.4.1 每次检验，应同时进行阳性对照生长试验。 3.4.2 对照试验加入的已知活菌量，每批样品应控制在50～100个范围之内。 3.4.3 常用的阳性对照菌株，卫生部检定所编号：大肠杆菌44102、绿脓杆菌10104、金黄 色葡萄球菌26003等。 3.4.4 作阳性菌株对照试验时，应注意安全，严格防止对照菌污染样品和环境。 4 细菌总数测定方法 4.1 方法原理 每种细菌有它一定的生理特性、生长时对营养、温度、时间、pH、需氧性等的要求均不 相同。在实际培养中，不可能同时满足所有细菌的要求，因此只能测定在营养琼脂上发育的 嗜中温性需氧及兼性厌氧的细菌菌落总数。 4.2 材料和仪器 a. 恒温培养箱； b. 电热恒温水锅； c. 移液管：1mL及10mL； d. 平皿：φ90mm； e. 试管：18mm×200mm f. 试管架； g. 放大镜。 4.3 培养基和试剂 a. 营养琼脂培养基； b. 生理盐水：定量分装于试管(每支试管内9mL)。 4.4 试验程序 1∶10试液 ↓ 做几个连续倍数的稀释液 ↓ 选择2～3个连续稀释度，各加1mL于相应平皿 ↓ 平皿加入12～15mL营养琼脂 36±1℃↓48±2h 菌 落 计 数 4.5 试验步骤 4.5.1 试液稀释及培养 4.5.1.1 用1mL移液管取1∶10试液1mL，沿管壁加入盛有9mL盐水的试管(管的尖端不要触及 液面)，振摇试管，作成1∶100均匀稀释液。 4.5.1.2 另取1mL移液管，按上述(4.5.1.1)操作制10倍递增稀释液，每次更换一支移液管 ，稀释至10[-3]～10[-5]倍。 4.5.1.3 选择2～3个连续稀释度，用吸取该稀释度的移液管，移1mL试液于平皿内，每个稀 释度作2～3个平皿。 4.5.1.4 将预先放在45±1℃恒温水浴中的营养琼脂培养基，加入平皿约15mL，并转动平皿 混合均匀。同时再将营养琼脂15mL倾斜加入装有1mL不含试样的稀释剂平皿中，作为空白对 照。 4.5.1.5 琼脂凝固后，翻转平皿，置36±1℃培养箱内，48±2h取出进行菌落计数。平皿菌 落数乘以稀释倍数，即为每克样品所含菌落总数。 4.5.2 计数方法 4.5.2.1 用肉眼观察，必要时用放大镜。 4.5.2.2 求出同一稀释度各平皿的菌落平均值。若平皿中有连成大片的菌落生长，该平皿 不宜计数。若片状菌落不到平皿的一半，其余一半的分布又很均匀，可将此半个计数后乘以 2，代表全皿。 4.5.2.3 选择平均菌落数在30～300之间的平皿，作为菌落总数的测定范围。当只有一个稀 释度符合此范围，即以该平皿菌落数乘以稀释倍数(见下表中例1)。 4.5.2.4 有两个稀释度，平均菌落数均在30～300之间，则应求出两者菌落总数之比值决定 。小于或等于2，报告其平均数；大于2则报告其中较小的菌落数(见下表中例2及例3)。 4.5.2.5 所有稀释度，其平均菌落均大于300个，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍 数(见下表中例4)。 4.5.2.6 所有稀释度的平均菌落均小于30个，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数( 见下表中例5)。 4.5.2.7 所有稀释度的平均菌落均不在30～300个之间，则以最接近30或300的乘以稀释倍 数(见下表例6)。 4.5.2.8 所有稀释度均无菌落生长，为每克小于10个。 4.5.3 报告 菌落数在100以内，按实数值报告；大于100，采用二位有效数字乘以10的指数来表示， 有效数字后面的数值用修约法处理。以n/g为计量单位。 细菌计数结果及报告方法 ________________________________________________________________________________ 不同稀释度的平均菌落数 两稀释度 菌落总数 报告方式 例次 10[-1] 10[2] 10[3] 菌数之比 n/g n/g ________________________________________________________________________________ 1 1365 164 20 - 16400 1.6×10[4] 2 2760 295 46 1.6 38000 3.8×10[4] 3 2890 270 60 2.2 27100 2.7×10[4] 4 不可计 4650 513 - 513000 5.1×10[5] 5 27 11 5 - 270 2.7×10[2] 6 不可计 305 12 - 30500 3.1×10[4] ________________________________________________________________________________ 5 霉菌和酵母菌数测定方法 5.1 方法原理 真菌具有明显的细胞核，多数需氧，在偏酸含糖的培养基、较高湿度25～28℃的温度条 件下生产良好。本方法根据这些生物特性，进行培养和菌落计数。 5.2 材料和仪器 a. 恒温培养箱； b. 振荡器； c. 电热恒温水浴锅； d. 试管：15mm×150mm； e. 移液管：1mL和10mL； f. 平皿：φ90mm； g. 生物显微镜； h. 载破片、盖破片。 5.3 培养基和试剂 a. 虎红琼脂培养基； b. 蒸馏水：定量分装于试管(每支试管9mL)。 5.4 试验程序 1∶10试液 ↓振荡30min 做几个连续倍数的稀释液 ↓ 选择3个连续稀释度，各加1mL于相应平皿 ↓ 每皿加入12～15mL培养基 25～28℃↓72h 菌 落 计 数 5.5 试验步骤 5.5.1 试液稀释及培养 5.5.1.1 将1∶10试液置振荡器中，振荡30min，使霉菌孢子充分散开。 5.5.1.2 按细菌总数测定4.5.1.1～4.5.1.2中规定的稀释方法，稀释至10[-1]～10[-4]。 5.5.1.3 根据试样污染程度，选择3个连续稀释度，分别移1mL稀释液于相应平皿中。 每个稀释度做2～3个平甲。然后将预先放在水浴锅中的45±1℃的虎红琼脂培养基，分 别加入约15mL，并转动平皿，混合均匀。同时按细菌总数测定中的方法，做空白对照。 5.5.1.4 待琼脂凝固后，倒置于25～28℃培养箱中，72±2h取出进行菌落计数。 5.5.2 计数方法 用肉眼观察，选择同一稀释度平均菌落数在5～50个之间的，乘以稀释倍数，作为霉菌 和酵母菌总数。计数和报告中所遇到的各种情况，按细菌总数测定4.5.2中的规则。 注：计数时，如不能肯定是霉菌和酵母菌，可取培养物涂片，直接镜检或革兰氏染色后 镜检。 6 大肠菌群、粪大肠菌群检验方法 6.1 方法原理 根据其所具有的生物学特性。如革兰氏阴性无芽胞杆菌，分别在37℃和44℃、24～48h 能发酵乳糖、产酸、产气，并能在选择性培养基上产生典型菌落，能分解色氨酸产生靛基质 等。 6.2 材料和仪器 a. 恒温培养箱； b. 电热恒温水浴； c. 试管及小倒管：15mm×150mm； d. 移液管：1mL、10mL； e. 平皿：φ90mm； f. pH试纸； g. 生物显微镜； h. 载破片和盖破片。 6.3 培养基和试剂 a. 乳糖胆盐培养基； b. 伊红美兰琼脂(EMB)； c. 革兰氏染色液； d. 蛋白胨水； e. 靛基质试剂； f. 乳糖发酵培养基。 6.4 试验程序 1∶10试液 ↓ 做三个连续稀释度 ↓ 乳糖胆盐发酵管 36±1℃↓48h _________________________ ↓ ↓ 不产酸、不产气 产酸、产气 ↓ ________________________ 阴性 ｜ ｜ 乳糖胆盐发酵管 证实试验 44℃↓～48h ↓ ________________ ____________ ↓ ↓ ↓ ↓ 不产酸、产气 产酸、产气 EMB平板 乳糖发酵 ↓ ↓ 阴性 _________________ ↓ ↓ 靛基质试验 EMB平板 36±1℃↓24h 梁色镜检 6.5 试验步骤 6.5.1 试液稀释 6.5.1.1 用1∶10试液，按细菌总数测定4.5.1.1～4.5.1.2中的方法做10倍递增稀释液。 6.5.1.2 根据样品的污染情况，选择三个连续稀释度。 6.5.2 大肠菌群 6.5.2.1 将试液分别接种于预先装有10mL乳糖胆盐培养基的试管内，每管1mL，每一稀释度 接种3管，置36±1℃培养48h，如所有试管内部不产酸，不产气，则可报告大肠菌群阴性。 如有产气、产酸者则需按6.5.2.2进一步做证实试验。 6.5.2.2 划线接种于EMB平皿，置36±1℃，培养18～24h，取出观察形态，挑取可疑菌落做 染色镜检，同时做乳糖发酵试验，凡乳管产气、镜检为革兰氏阴性无芽胞杆菌，即可报告大 肠菌群阳性。 6.5.3 粪大肠菌群 6.5.3.1 将第一次产酸、产气的乳糖胆盐培养物，分别以1mL接种于各乳糖胆盐发酵管内， 置44±0.5℃水浴锅，培养24～28h。如所有乳糖胆盐发酵管都不产酸，不产气，则可报告粪 大肠菌群阴性，如产酸、产气，则进行6.5.3.2～6.5.3.5程序。 6.5.3.2 划线接种于EMB平皿，置36±1℃，培养18～24h，同时接种于蛋白胨水，置44±0. 5℃培养24h。 6.5.3.3 经培养后，在EMB平皿上典型大肠菌群菌落，呈深紫黑色，圆形、边缘整齐，表面 光滑湿润。常见有金属光泽。也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深 的菌落。 6.5.3.4 挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检。 6.5.3.5 在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂0.5mL，阳性反应则液面呈现玫瑰红色，阴 性反应液面呈试剂本色。 6.5.3.6 平皿上有典型菌落，经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则报告粪大 肠菌群阳性。 7 绿脓杆菌检验方法 7.1 方法原理 根据本菌生物学特征：革兰氏阴性杆菌、氧化酶试验阳性，能产生绿脓菌素。此外还能 液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐。在42℃条件下生长等，可与类似菌相区别。 7.2 材料和仪器 a. 恒温培养箱； b. 冰箱； c. 三角烧瓶：500mL、300mL； d. 试管：φ18mm×200mm； e. 平皿：φ90mm； f. 移液管：1mL、10mL； g. 生物显微镜； h. 载破片及盖破片； i. 接种环及针； j. 酒精灯； 7.3 培养基和试剂 a. 营养琼脂培养基(普通肉汤培养基)； b. 十六烷三甲基溴化铵培养基； c. 乙酰胺培养基； d. 绿脓菌色素测定用培养基； e. 明胶培养基； f. 硝酸盐蛋白胨水培养基； g. 1%的二甲基对苯二胺试液； h. 三氯甲烷(氯仿)； i. 1mol/L的盐酸。 7.4 试验程序 1∶10试液 ↓ 普通肉汤培养液，增菌 37℃↓18～24h 十六烷三甲基溴化铵培养基、分离培养 37℃↓18～24h 普通肉汤培养基、纯培养 37℃↓18～24h __________________________ ↓ ↓ 染色镜检 生化试验 _________________ ↓ ↓ 氧 绿 硝 产 明 42℃ 化 脓 酸 气 胶 生 酶 菌 盐 试 液 长 试 素 还 验 化 试 验 试 原 试 验 验 产 验 气 试 验 7.5 试验步骤 7.5.1 增菌：取1∶10试液10mL，放入装有90mL普通肉汤培养液的三角烧瓶中，在37℃下培 养18～24h，有绿浓菌生长时，培养液表面多有一层薄菌膜，且呈黄绿色或蓝绿色。 7.5.2 分离培养：挑取增菌培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平皿上(也可划线 接种在乙酰胺培养基上)。在37℃培养18～24h，在培养基上，菌落扁平无定型、呈灰白色。 向周边扩散或略有蔓延、表面湿润，周围的培养基常扩散有水溶性色素(在乙酰胺培养基上 ，菌落扁平、边缘不整齐，周围的培养基略带粉红色，而其他菌不生长)。 7.5.3 纯培养：挑取可凝绿脓杆菌的分离培养物菌落2～3个放入肉汤培养基，在37℃培养1 8～24h。 7.5.4 染色镜检：挑取可疑菌落、涂片、革兰氏染色，经镜检为阳性者，进行氧化酶试验 。 7.5.5 氧化酶试验；取一小块白色滤纸，放在平皿内，用玻璃棒挑取绿脓杆菌的可疑菌落 ，涂在滤纸上，加1滴新配制的二甲基对苯二胺试液(1%)，30s内出现粉红色或紫红色，为阳 性；若培养物不变色，氧化酶试验为阴性。 7.5.6 绿脓杆菌试验：取可疑菌落2～3个，分别接种在绿脓菌素测定培养基上，在37℃培 养24h，加入氯仿3～5mL，充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液 呈蓝色时，用移液管将氯仿移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL左右，振荡后静置片刻 。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，说明样品中有绿脓菌素存在。 7.5.7 硝酸盐还原产气试验：挑取被检的纯培养物，接种在硝酸盐胨水培养基中，置37℃ 培养24h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小试管中有气体者，为阳性。表明该菌能 还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氧气。 7.5.8 明胶液化试验：取绿脓杆菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，在37 ℃培养24h，取出放入冰箱(0～4℃)10～30min，仍呈溶解状，为阳性凝固不溶解者为明胶液 化试验阴性。 7.5.9 42℃生长试验：挑取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，在42±1℃，培养24 ～48h，绿脓杆菌能生长，为阳性。 7.6 试验结果：试样经增菌、分离培养、证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验 均为阳性者，样品判为有绿脓杆菌；绿脓菌素试验阴性而液化明胶，硝酸盐还原产气和42℃ 生长试验皆为阳性时，仍判样品中有绿脓杆菌。 8 金黄色葡萄球菌检验方法 8.1 方法原理 根据本菌的特有形态及培养特性，应用Baird-parker平皿进行分离，该平皿中的氯化锂 可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，提高检出率，并利用分 解甘露醇和血浆凝固酶等特征，以兹鉴别。 8.2 材料与仪器 a. 生物显微镜； b. 恒温培养箱； c. 离心机； d. 移液管：1mL、10mL； e. 试管：φ15mm×150mm； f. 三角烧瓶：500mL或300mL； g. 载破片、盖破片； h. 接种环或针； i. 酒精灯。 8.3 试剂和培养基 a. 7.5%的氯化钠肉汤； b. Baird-parker平皿； c. 血琼脂培养平皿； d. 甘露发酵培养基； e. 盐水； f. 血浆。 8.4 试验程序 1∶10试验 ↓ 7.5%的氯化钠肉汤、增菌 36±1℃↓24h Brird-parker 平皿、分离培养 36±1℃↓24～48h 血琼脂平皿、纯培养 36±1℃↓24h _____________________________ ↓ ↓ ↓ 染色镜检 甘露醇发酵试验 血浆凝固酶试验 8.5 试验步骤 8.5.1 增菌：取1∶10试液10mL，放入装有90mL7.5%的氯化钠肉汤的三角烧瓶中，在36±1 ℃培养24～48h。Baird-parker平皿上有圆形光滑凸起，湿润直径为2～3mm，呈灰色到墨色 ，边缘色谈，周围呈一浑浊带，外层有一透明带。无Baird-parker培养基可划线接种在血琼 脂平皿上培养。血琼脂平皿上的菌落呈金黄色，大而突起，圆形不透明，表面光滑，周围有 溶血圈。 8.5.3 纯培养：从分离培养皿上，挑取单个疑似菌落接种于血琼脂平皿上，在36±1℃下培 养24h。 8.5.4 染色镜检：挑取纯培养的疑似菌落进行涂片和革兰氏染色、镜检。金黄色葡萄球菌 为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无牙胞，无荚膜。致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为 0.5～1μm。 8.5.5 甘露醇发酵试验；取纯培养菌落接种到甘露醇发酵培养基中，在36±1℃培养24h。 金黄色葡萄球菌能发酵甘露醇产酸，培养基呈红色。 8.5.6 血浆凝固酶试验：吸取1∶4的新鲜兔血浆0.5mL，放入试管，加入待检的增菌24h肉 汤培养物0.5mL。混匀后放入36±1℃的培养箱或水浴锅中，每半小时观察一次，24h之内呈 现凝块，为阳性。同时用已知血浆凝固酶试验阳性和阴性菌株，作为对照。 8.6 试验结果 上述选择平皿上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵 甘露醇产酸，血浆凝固酶试验阳性者，表明样品中有金黄色葡萄球菌。 附 录 A 微生物学检验的有关培养基和试剂 (补充件) A1 营养琼脂培养基(肉汤琼脂培养基) a. 成分 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼 脂 15g 牛肉膏 3g 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 将蛋白胨、氯化钠、琼脂、牛肉膏加到蒸馏水中，微温使溶，再加热煮沸，待琼脂完全 溶化后，混匀，用1mol/L NaOH溶液调pH值为7.4±0.2，过滤，分装于三角烧瓶，经121℃， 高压灭菌20min后，贮存0～4℃冷暗处备用。 A2 虎红琼脂培养基 a. 成 分 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 1g 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g 琼 脂 20g 4/3000虎红水溶液 100mL 蒸馏水 900mL b. 制 法 将上述(除虎红水溶液外)各成分，分别加于蒸馏水中，加热溶解，过滤，再加入虎红水 溶液(四氯四碘荧光素溶液)，同A1中b项分装后，在121℃高压灭菌20min。 A3 乳糖胆盐培养基 a. 成 分 蛋白胨 20g 猪胆盐 5g 乳 糖 5g 0.4%溴甲酚紫水溶液 2.5mL 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 将蛋白胨、猪胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH值为7.4，加入指示剂(0.4%溴甲酚紫水溶 液)混匀，分装于有小倒管的试管中(见A12中b项)，置于115℃高压灭菌20min。 A4 伊红美兰(EMB)琼脂 a. 成 分 蛋白胨 10g 乳 糖 10g 磷酸二氢钾 2g 琼 脂 20g 2%伊红水溶液 20mL 0.5%美兰水溶液 13mL 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 先将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸二氢钾、蛋白胨混匀，使之溶 解，再以蒸馏水补足至1 000mL，调pH值为7.2～7.4，分装于烧瓶内，在121℃高压火菌15mi n后备用。用时，加入乳糖并加热融化琼脂，在60℃左右以无菌手续加入灭菌的伊红、美兰 溶液，摇匀，倾注平皿使用。 A5 蛋白胨水 a. 成 分 蛋白胨 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 将上述成分加热熔化，调pH值为7.0～7.2，分装小试管，经121℃高压灭菌15min。 A6 靛基质试剂(柯凡克试剂) a. 成 分 戊 醇 75mL 对二甲氨基苯甲醛 5g 浓盐酸 25mL b. 制 法 将对二甲氨基苯甲醛加入戊醇中，搅动使之完全溶解，然后1滴1滴缓慢地加入盐酸25mL 。 A7 革兰氏染色液 A7.1 染液制备 A7.1.1 结晶紫染色液 a. 成 分 结晶紫 1g 95%乙醇 20mL 1%草酸铵水溶液 80mL b. 制 法 将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸溶液混合。 A7.1.2 革兰氏碘液 a. 成 分 碘 1g 磺化钾 2g 蒸馏水 300mL b. 制 法 将碘与碘化钾进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至30 0mL。 A7.1.3 脱色液：95%乙醇 A7.1.4 复染液 A7.1.4.1 沙黄复染液 a. 成 分 沙 黄 0.25g 95%乙醇 10mL 蒸馏水 90mL b. 制 备 将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。 A7.1.4.2 稀石炭酸复红液 a. 成 分 碱性复红 10g(研细) 第一步 95%乙醇 100mL 5%石炭酸水溶液 90mL 第二步 蒸馏水 90mL b. 制 法 将碱性复红加入乙醇，放约12h，过滤。取该溶液10mL，加入5%石炭酸水溶液，混合； 再取此液10mL加入蒸馏水，即为(1∶10)稀石碳酸复红液。 A7.2 染色法 A7.2.1 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，水洗。 A7.2.2 滴加革兰氏碘液，作用min，水洗。 A7.2.3 滴加95%乙醇脱色，约30s。 A7.2.4 滴加复染液(沙黄)，复染1min，水洗，待干，镜检(注：用稀石炭酸复红液复染， 仅需10s)。 A7.3 染色结果 革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 A8 十六烷三甲基溴化铵培养基 a. 成 分 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 十六烷三甲基溴化铵 0.3g 琼 脂 20g 蒸馏水 1 000mL b. 制 备 将除琼脂外的其他成分混合，加热溶解，调pH值为7.4～7.6，加入琼脂，经115℃高压 灭菌20min后，制成平皿备用。 A9 乙酰胺培养基 a. 成 分 乙酰胺 10g 氯化钠 5g 无水磷酸氢二钾 1.39g 无水磷酸二氢钾 0.73g 硫酸镁(MgSO4·7H2O) 0.5g 酚 红 0.012g 琼 脂 20g 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 除琼脂和酚红外，将其他成分加到蒸馏水中，加热溶解调pH值为7.2，加入琼脂、酚红 经121℃高压灭菌20min后，制成平皿备用。 A10 绿脓菌色素测定用培养基 a. 成 分 蛋白胨 20g 氯化镁 1.4g 硫酸钾 10g 琼脂 10g 丙三醇(甘油)(化学纯) 10g 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加温使之溶解，调pH值为7.4，加入琼脂和 甘油，加热溶解，分装于试管内，115℃高压灭菌20min后，制成斜面备用。 A11 明胶培养基 a. 成 分 牛肉膏 3g 蛋白胨 5g 明 胶 120g 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 取各成分加在蒸馏水中浸泡20min，随时搅拌加温使之溶解，调pH值为7.4，分装于试管 内，经115℃高压灭菌20min后，直立放置凝后备用。 A12 硝酸盐蛋白胨水培养基 a. 成 分 蛋白胨 10g 酵母浸膏 3g 硝酸钾 2g 亚硝酸钠 0.5g 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中，加温使之溶解，调pH值为7.2，煮沸过滤后补足液 量，加入硝酸钾和亚硝酸钠，溶解混匀，分装到加有小倒管的试管中，经115℃高压灭菌20m in后备用。 A13 7.5%的氯化钠肉汤 a. 成 分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 75g 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 将上述成分放入蒸馏水中加热溶解，调pH值为7.4，分装后经121℃高压灭菌15min。 A14 Baird-parker平皿 a. 成 分 胰蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 酵母浸膏 1g 丙酮酸钠 10g 甘氨酸 12g 氯化锂(LiCl·6H2O) 5g 琼 脂 20g 蒸馏水 950mL b. 制 法 将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸完全溶解，冷至25℃，调pH值为7.0±0.2。分装每瓶 95mL，经121℃高压灭菌15min。临用时，加热溶化，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚碲酸钾 增菌剂5mL，摇匀后倾注平皿。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱贮存不得超过48h( 注：增菌剂的配制：30%的卵黄生理盐水50mL，与除菌过滤1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存 于冰箱内)。 A15 血琼脂培养基 a. 成 分 营养琼脂 100mL 脱纤维兔血浆 10mL b. 制 法 将营养琼脂加热溶化，待冷至50℃左右，以无菌手续加入脱纤维兔血浆，摇匀，制成平 皿，置冰箱内备用。 c. 血浆制备 取3.9%柠檬酸钠溶液(121℃灭菌30min)。每1份加入全血4份，混匀静置，2 000～3 000 r/min离心3～5min。血球下沉，取上面血浆。 A16 甘露醇发酵培养基 a. 成 分 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 甘露醇 10g 牛肉膏 5g 0.2%溴麝香草酚蓝溶液(指示剂) 12mL 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH值为7.4，加入甘露醇和指 示剂，混匀后分装试管中，经115℃高压灭菌20min后备用。 A17 乳糖发酵培养基 a. 成 分 蛋白胨水 2g 氯化钠 3g 磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O) 2g 0.4%溴麝香草酚蓝液(BTB) 6mL 乳 糖 5g 蒸馏水 1 000mL b. 制 法 除乳糖和BTB外的其他成分，加在蒸馏水中，微湿溶解，调pH值为7.4，加入乳糖和BTB ，混匀，分别装于有倒管的试管内，每管约5mL，经115℃高压灭菌20min后备用。 ______________________ 附加说明： 本标准由国家建筑材料工业局碱阳非金属矿研究所负责起草。 本标准主要起草人潘宇清。